實(shí)驗(yàn)樣本類型多，提取DNA需要買好幾種試劑盒？今天小新為有這方面煩惱的用戶推薦一款新產(chǎn)品——快速通用型基因組DNA提取試劑盒，這款試劑盒能從容應(yīng)對(duì)各類常見(jiàn)樣本，讓您做到“一盒在手，各種DNA都有”。接下來(lái)就讓小新帶大家看看這款試劑盒是不是真有這么好用。

一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

測(cè)試快速通用型基因組DNA提取試劑盒對(duì)不同類型樣本基因組DNA的提取效果。

二、 實(shí)驗(yàn)材料

枯草桿菌、豬肉、小蓬草、人的糞便、人的抗凝全血、1.5 ml離心管若干

快速通用型基因組DNA提取試劑盒（Simgen Cat.No.3302050）

2×PCR Mix（Simgen Cat.No.7003100）

人1.3 kb β-球蛋白引物（F：TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/R：CCAGGATTTTTGATGGGACACG）

細(xì)菌16s rDNA引物（27F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG/1492R：GGHTACCTTGTTACGACTT）

植物GAPDH引物（F：GCTCACTTGAAGGGTGG/R：CCATTCGTTGTCGTACCA）

溶菌酶（Simgen Cat. No. 8009500）

研缽

旋渦振蕩器（越新儀器，XH-C）

臺(tái)式小量離心機(jī)（eppendorf centrifuge 5415 D）

電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海宜昌儀器紗篩廠）

超微量分光光度計(jì)（Simgen Cat.No.sim100）

電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型）

PCR儀（Techne FPROG5Y Progene Thermal）

三、 實(shí)驗(yàn)步驟

（一）樣本DNA提取

樣本使用前處理：

【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】

1. 用手術(shù)刀切取50 mg豬肉組織，再用刀尖將組織剁成勻漿狀，轉(zhuǎn)入一個(gè)潔凈的1.5 ml離心管中。

2. 加入150 μl Buffer TE、300 μl Buffer GE，旋渦振蕩30秒混合均勻。

3. 加入20 μl蛋白酶K貯存液，56℃水浴10分鐘。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力搖晃5~10次形成乳濁液，再旋渦振蕩30秒混合均勻，最高速（≥12,000×g）離心1分鐘。

【從植物組織中提取基因組DNA】

1. 稱取200 mg小蓬草植物組織，剪成小塊放入研缽中，加入液氮，使組織冷凍完全后，快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止組織融化，研磨充分后將研缽放入56℃水浴至樣品粉末剛開(kāi)始融化。加入300 μl Buffer TE，繼續(xù)研磨30秒混勻。

2. 轉(zhuǎn)移200 μl研磨好的勻漿至1.5 ml離心管中，如勻漿體積不足200 μl，補(bǔ)加Buffer TE至200 μl。

3. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K貯存液，立即旋渦振蕩1分鐘混合均勻。56℃水浴10分鐘。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力搖晃5~10次形成乳濁液，再旋渦振蕩30秒混合均勻，最高速（≥12,000×g）離心5分鐘。

【從培養(yǎng)細(xì)胞﹑淋巴細(xì)胞﹑全血或骨髓、骨頭中提取基因組DNA】

1.   收集200 μl全血于1.5 ml離心管。

2.   加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K貯存液。立即旋渦振蕩30秒混合均勻。

3.   56℃水浴10分鐘。

4.   加入500 μl Buffer PE，用力搖晃5~10次形成乳濁液，再旋渦振蕩30秒混合均勻，最高

速（≥12,000×g）離心1分鐘。

【從細(xì)菌中提取基因組DNA】

1. 用1.5 ml離心管收集5 ml細(xì)菌培養(yǎng)物，加入100 μl Buffer TE，旋渦振蕩充分懸浮細(xì)菌。加入100 μl溶菌酶溶液，旋渦振蕩約15秒混勻，37 ℃水浴30分鐘。

2. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K貯存液。立即旋渦振蕩30秒混合均勻。

3. 56℃水浴10分鐘。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力搖晃5~10次形成乳濁液，再旋渦振蕩30秒混合均勻，最

高速（≥12,000×g）離心1分鐘。

【從糞便中提取基因組DNA】

1. 用1.5 ml離心管收集50 mg糞便，加入150 μl Buffer TE，旋渦振蕩直至糞便顆粒全部懸浮。

2. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K貯存液。立即旋渦振蕩30秒混合均勻。

3. 56℃水浴10分鐘。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力搖晃5~10次形成乳濁液，再旋渦振蕩30秒混合均勻，最高速（≥12,000×g）離心1分鐘。

【后續(xù)相同的操作步驟】

5. 吸取所有上清液加入到核酸純化柱中（核酸純化柱置于2 ml離心管中），蓋上管蓋，12,000×g離心30秒。

6. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，在核酸純化柱中加入800 μl Buffer WB，蓋上管蓋，12,000×g離心30秒。

7. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，在核酸純化柱中加入300 μl Buffer WB，蓋上管蓋，最高速（≥12,000×g）離心1分鐘。

8. 棄2 ml離心管，將核酸純化柱置于一個(gè)潔凈的1.5 ml離心管中，在純化柱的膜中央加入100 μl 56℃溫育的Buffer TE，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12,000×g離心30秒。

9. 棄純化柱，得到的DNA放于﹣20℃冰箱備用。

（二）PCR擴(kuò)增

擴(kuò)增體系：

擴(kuò)增條件：

1. 全血DNA（人1.3 kb β-球蛋白引物）/糞便DNA（細(xì)菌16s rDNA引物）：94℃,5 min，{94℃,45sec；55℃,45sec；72℃,1min30sec}×30 cycles，72℃,10min。

2. 小蓬草DNA（植物GAPDH引物）：96℃,3 min，{94℃,30sec；58℃,50sec；72℃,1min}×35 cycles，72℃,10min。

四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. 在超微量分光光度計(jì)上用Buffer TE調(diào)零，測(cè)量提取的DNA，結(jié)果如下：

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上加入5 μl洗脫的基因組DNA/擴(kuò)增產(chǎn)物/DNA Marker進(jìn)行電泳，結(jié)果如下：

一、 分析與討論

1. 由濃度測(cè)量結(jié)果和DNA電泳圖可知，快速通用型基因組DNA提取試劑盒從五種不同類型的樣本中都成功提取到了基因組DNA。這五類樣本包括了動(dòng)物、植物、細(xì)菌、糞便、血液這些常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)樣本，證明了快速通用型基因組DNA提取試劑盒的強(qiáng)大通用性。

2. 快速通用型基因組DNA提取試劑盒在提取上述各種樣本基因組DNA的過(guò)程中都沒(méi)有額外進(jìn)行RNase A的消化，但是將提取到的DNA電泳時(shí)卻都沒(méi)有觀察到殘留的RNA條帶，甚至是最容易殘留RNA的植物、細(xì)菌、糞便等樣本。說(shuō)明這個(gè)產(chǎn)品可以不用額外添加RNase A就能去除RNA。

3. 快速通用型基因組DNA提取試劑盒采用了一項(xiàng)特殊的萃取技術(shù)，能使樣本中被蛋白酶K消化后的各種殘留物（包括未消化完全的樣本碎片、蛋白、脂類物質(zhì)、色素、多糖等）都萃取到下相中。也就是說(shuō)在吸取上相過(guò)柱純化這一操作步驟前，DNA已經(jīng)提前進(jìn)行了一次預(yù)純化，這也就是為什么快速通用型基因組DNA提取試劑盒只需要一種洗液洗滌純化柱的原因。從后續(xù)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果中我們也可以發(fā)現(xiàn)，快速通用型基因組DNA提取試劑盒提取的DNA均不影響后續(xù)的PCR擴(kuò)增，即使是應(yīng)對(duì)糞便、植物這類抑制物較多的樣本也完全沒(méi)有問(wèn)題。

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