之前有個客戶投訴說我們的全血DNA小量試劑盒提取的血液DNA濃度很低，效果不好。小新感覺很奇怪，全血DNA小量試劑盒是我們的明星產品，采用專利技術方法提取的血液DNA，比市場上的血液DNA提取試劑盒操作更加簡便，加上樣本用量大，提取同一個血樣的時候，DNA濃度通常只會更高----于是小新立刻與客戶進行了溝通，經過詳細詢問才發現原來客戶之前經常提取質粒DNA，這次提取血液時怕劇烈操作會弄斷基因組DNA，因此沒有按照說明書寫的劇烈操作，而是溫和地操作。為了驗證是否是這個原因導致提取的DNA濃度低，小新決定實際測試一下。由于Simgen細菌DNA試劑盒同樣采用了全血DNA小量試劑盒的專利技術提取基因組DNA，小新決定先用細菌樣本測試一下。

實驗目的：

測試細菌DNA試劑盒提取過程中劇烈操作與溫和操作對實驗結果的影響。

實驗材料：

過夜培養的DH5α細菌、細菌DNA試劑盒（Simgen Cat. No.3302050）

旋渦震蕩器（越新儀器，XH-C）

臺式離心機（eppendorf Centrifuge 5415 D）

超微量分光光度計（Simgen Cat.No.sim100）

電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型 ）

實驗內容：

實驗結果：

1. 在超微量分光光度計上用Buffer TE調零，測量提取的DNA，結果如下：

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的DNA，電泳30 min，結果如下：

實驗討析： 

1. 從超微量分光光度計測量的結果上可以看出，劇烈操作提取的DNA濃度是溫和操作提取的4倍以上，Abs_260/280幾乎沒有差別，而Abs_260/230值劇烈操作提取的DNA更好 。

2. 從電泳圖上可以看到，兩種操作方法提取的DNA電泳的位置差不多，劇烈操作提取的DNA的亮度要明顯亮于溫和操作提取的DNA，與分光光度計測得的數據有較好的對應關系。

大腸桿菌的基因組DNA長度是4.7×10⁶bp，也就是說有接近5000kb的長度，這么長的DNA是非常容易斷裂的（僅僅是用移液器吸取一下DNA溶液就會對DNA有一個剪切的作用），更不用說比細菌基因組DNA更長的人類基因組DNA了。這種斷裂在整個提取過程中都是無法避免的，這就是為什么我們提取到的基因組DNA片段一般都集中在30-50kb的緣故。

Simgen細菌DNA試劑盒沒有使用蛋白酶K消化蛋白，所以更需要劇烈的操作步驟使DNA和蛋白質分離開，否則基因組DNA就伴隨著沉淀物丟失了。我們從電泳圖中也可以發現，溫和操作獲得的基因組DNA長度沒有比劇烈操作獲得的基因組DNA更長；劇烈操作獲得的基因組DNA也沒有非常嚴重的拖尾現象。因此建議大家在提取DNA的過程中一定要按照試劑盒說明書上的要求操作，如果遇到懷疑或不理解的操作步驟可以先和技術支持溝通一下，千萬不要想當然地去更改操作方法，否則結果可能是適得其反。